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Biología

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Libro Estandarización de una PCR múltiple Ver más grande

Estandarización de una PCR múltiple para la detección de Chlamydia Trachomates, Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum.

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Autores: Fredy Yamit León Diaz, Luis Francisco Becerra Galinfo y José Eugenio Cely Fajardo
Editorial: Universidad Distrital Francisco José de Caldas
Edición: Primera, Marzo 2011
Formato: Libro
Rústica, 17 x 24cms
105 páginas
Peso: 0.180 Kg
 ISBN: 9789588723150
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Reseña. Estandarización de una PCR múltiple para la detección de Chlamydia Trachomates, Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum a partir de muestras de semen y frotis endocervical

 Los géneros Mycoplasma, Ureaplasma y Chlamydia son considerados comensales del tracto genitourinario bajo de mujeres y hombres. Afectan entre el25 y el 53% de los hombres sexualmente activos y entre el 40 y 80% de las mujeres sexual mente activas. Mycoplasma hominis está involucrado en enfermedades como pielonefritis, artritis y peritonitis. Ureaplasma urealyticum es el principal causante de uretritis no gonococal ni chlamydial. Chlamydia trachomotis es el principal etiológico responsable de causar enfermedad de transmisión sexual por bacterias y se relaciona con problemas de infertilidad. El objetivo de este trabajo fue estandarizar una técnica de detección a nivel molecular para las tres bacterias propuestas, mediante el uso de la técnica PCR- Múltiple
Para la estandarización de la técnica se utilizaron sueros positivos de cada bacteria; demostrándose que el protocolo estandarizado es altamente sensible, especifico y replicable; posteriormente, se evaluaron con esta técnica 100 muestras de semen y 21 de frotis endocervical, provenientes de pacientes del área de fertilidad en Profamilia. En las muestras de semen se encontró una presencia de 11 in de Chlarnydia trochomatis y un 3% de Mycoplasma hominis. En las de frotis endocervical se encontró 1 positivo para Chlamydia trachomotis; no se encontraron pacientes positivos para Ureaplasma urealyticum. De los hombres positivos, el 64% tiene alguna alteración espermática y el restante presenta condiciones espermáticas normales, razón que lleva a inferir una posible relación entre la infección bacteriana y la calidad espermática.

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Contenido. Estandarización de una PCR múltiple para la detección de Chlamydia Trachomates, Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum a partir de muestras de semen y frotis endocervical

 Introducción
Problema
Planteamiento del problema
Pregunta de investigación
Justificación
Objetivos
Objetivo general
Objetivos específicos
Marco conceptual
Mycoplasmas
Características generales de los Mycoplasmas
Estructura antigénica
Genoma
Secuencias Diana u objetivo de Mycoplasma hominis y
Ureaplasma urealyticum
Patogenia
Infección por Mycoplasma hominis y Ureaplasma
urealyticum
Chlamydias
Estructura y composición antigénica
Antígenos
Genoma
Secuencia Diana
Ciclo de desarrollo
Patología
Serovariantes
Infección femenina Infección masculina
Métodos de diagnóstico tradicionales
Cultivo diferencial para Chlamydia trachomatis
Detección directa de Chlamydia trachomatis
Métodos de diagnóstico moleculares
Antecedentes de diagnóstico molecular de Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealitycum en Colombia
Alteraciones espermáticas
Azoospermia
Astenospermia y teratozoospermia
Índice de concordancia Kappa
Materiales y métodos
Obtención de las muestras Aspectos éticos
Lugar de estudio
Sueros bacterianos (DNA bacteriano) utilizados en el estudio
Aislamiento de ADN cromosomal de muestras
Amplificación de las muestras por medio de la técnica PCR múltiple
Condiciones de la mezcla maestra
Iniciadores
Diseño de iniciadores
Evaluación de los productos de amplificación
Confirmación de resultados positivos
 Análisis estadístico
Índices de concordancia
Representación de resultados
Resultados
Estandarización de la técnica de PCR múltiple
Especificidad de los iniciadores Reproducibilidad de la PCR múltiple [T2]
Análisis de las muestras problema
Presencia de alteraciones espermáticas en pacientes positivos para la PCR múltiple
Análisis de resultados

Conclusiones

Referencias

Anexos
Anexo 1. Consentimiento informado
Anexo 2. Protocolo para extracción de ADN a partir de tejidos CIDBIO®
Apéndice A Apéndice B
Anexo 3. Buffer TBE 10X
Lista de figuras
Figura 1-32
Lista de tablas
Tabla 1-9

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